作者  |  徐翔斌

校對(duì)  |  王欣桐  陳潔

 

一、背景

熊去氧膽酸（Ursodeoxycholic acid，UDCA）作為膽結(jié)石和膽汁淤積性肝硬化等疾病的常用藥，具有利膽、保肝、降糖、降脂和免疫調(diào)節(jié)等重要特性。中藥學(xué)家和傳統(tǒng)中醫(yī)首次將UDCA用于治療肝臟疾病的歷史可以追溯到一千多年前。在發(fā)現(xiàn)其具有溶解膽結(jié)石的功效之前，其主要用途是作為肝臟補(bǔ)品。2004年07月，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)Axcan制藥公司生產(chǎn)熊去氧膽酸片劑（500 mg）治療原發(fā)性膽汁淤積性肝硬化（PBC）。該藥是目前唯一被美國(guó)FDA批準(zhǔn)治療PBC的藥物。幾十年來(lái)的臨床研究表明，UDCA除具有利膽、抗凋亡、抗氧化，還具有降血脂和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。UDCA通過(guò)多種復(fù)雜和互補(bǔ)的機(jī)制作用于肝臟，包括改變膽汁酸池、作為細(xì)胞保護(hù)劑、免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)和親水性膽汁酸；此外，通過(guò)抑制腸內(nèi)膽固醇的吸收和降低膽脂中膽固醇含量使膽固醇分泌入膽汁減少，從而顯著降低膽汁中膽固醇飽和度[1]。

熊去氧膽酸膠囊（商品名：Ursofalk®）分別于1978年與1994年在德國(guó)和中國(guó)獲批上市，現(xiàn)主要用于膽囊收縮功能正常、X射線能穿透結(jié)石的膽固醇性膽囊結(jié)石、膽汁淤積性肝病和膽汁返流性胃炎的治療。

本文將結(jié)合相關(guān)指導(dǎo)原則和文獻(xiàn)研究，詳細(xì)闡述熊去氧膽酸膠囊人體生物等效性試驗(yàn)的一般考慮，對(duì)本品人體生物等效性研究的若干關(guān)鍵設(shè)計(jì)進(jìn)行探討，旨在為此類(lèi)產(chǎn)品的仿制和注冊(cè)申報(bào)提供參考。

 

二、品種基本情況

通用名稱(chēng)：熊去氧膽酸膠囊

商品名稱(chēng)：Ursofalk®/優(yōu)思弗®

英文名稱(chēng)：Ursodeoxycholic Acid Capsules

化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

 

規(guī)格：250 mg

適應(yīng)癥：

1.膽囊膽固醇結(jié)石：必須是X射線能穿透的結(jié)石，同時(shí)膽囊收縮功能須正常；

2.膽汁淤積性肝?。ㄈ纾涸l(fā)性膽汁性肝硬化）；

3.膽汁反流性胃炎。

用法用量：

1.膽囊膽固醇結(jié)石和膽汁淤積性肝病

按時(shí)用少量水送服。按體重每日劑量為10 mg/kg，即：

溶石治療：一般需6~24個(gè)月，服用12個(gè)月后結(jié)石未見(jiàn)變小者，停止服用。治療結(jié)果根據(jù)每6個(gè)月進(jìn)行超聲波或X射線檢查判斷。

2.膽汁反流性胃炎

晚上睡前用水吞服，必須定期服用，一次一粒（250 mg），一日一次。一般服用10~14天，遵從醫(yī)囑決定是否繼續(xù)服藥。

 

三、理化性質(zhì)、處方與溶出情況

1、理化性質(zhì)

溶出情況：熊去氧膽酸膠囊屬于BCSⅡ類(lèi)藥物，溶解性為其在體內(nèi)吸收的限速步驟，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究[4]對(duì)原研制劑溶出的考察，熊去氧膽酸膠囊在各pH介質(zhì)中的溶解性如下：

從上述溶出曲線可知，熊去氧膽酸膠囊在各個(gè)介質(zhì)中溶出在30 min時(shí)仍低于80%，且介質(zhì)pH越高溶出越快，屬于PH依賴(lài)性藥物。原研說(shuō)明書(shū)中提示空腹?fàn)顟B(tài)下熊去氧膽酸膠囊在1小時(shí)和3小時(shí)兩次出現(xiàn)峰濃度，因此pH1.2、pH4.5、pH6.0均為其體外溶出考察較為關(guān)鍵的溶出條件。

熊去氧膽酸是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCB11、SLCO1A2與SLC10A1的底物，這三個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主要分布在肝臟及膽道。對(duì)于低溶高滲的藥物，需重點(diǎn)關(guān)注輔料對(duì)于藥物溶解的影響，在藥學(xué)開(kāi)發(fā)階段需重點(diǎn)關(guān)注受試制劑和參比制劑在輔料成分的型號(hào)和含量的一致性。

 

四、生物等效性評(píng)價(jià)

FDA（草案）[5]：?jiǎn)蝿┝浚?00 mg×2）、2*2交叉體內(nèi)研究（空腹+餐后），測(cè)定血漿中非結(jié)合熊去氧膽酸和總熊去氧膽酸（非結(jié)合熊去氧膽酸+熊去氧膽酸甘氨酸結(jié)合物+?；撬峤Y(jié)合物），BE評(píng)價(jià)物質(zhì)基線校正前及基線校正后的非結(jié)合熊去氧膽酸和總熊去氧膽酸，測(cè)量給藥前-48、-42、-36、-30、-24、-18、-12、-6、0 h體內(nèi)基線值，若基線穩(wěn)定，可以將基線采樣時(shí)間縮短到-24~0 h，應(yīng)以基線期平均濃度進(jìn)行校正, 校正后的濃度若為負(fù)值則計(jì)為零。對(duì)于餐后組，應(yīng)在測(cè)量給藥-48、-24、0 h基線值前30分鐘內(nèi)受試者進(jìn)食完標(biāo)準(zhǔn)高脂餐。

EMA[6]：?jiǎn)蝿┝浚?50 mg）、2*2交叉（空腹），測(cè)定血漿中非結(jié)合熊去氧膽酸（給藥前一天測(cè)定基線值），BE評(píng)價(jià)物質(zhì)基線校正后的非結(jié)合熊去氧膽酸，測(cè)定給藥前24小時(shí)基線值并校正（與給藥當(dāng)天保持相同的標(biāo)準(zhǔn)餐及相應(yīng)的采血點(diǎn)）。

CDE[7]：?jiǎn)蝿┝浚?50 mg×2）、平行設(shè)計(jì)或2*2交叉體內(nèi)研究（空腹+餐后），測(cè)定血漿中非結(jié)合熊去氧膽酸和總熊去氧膽酸（非結(jié)合熊去氧膽酸+熊去氧膽酸甘氨酸結(jié)合物+?；撬峤Y(jié)合物），BE評(píng)價(jià)物質(zhì)基線校正后的非結(jié)合熊去氧膽酸和總熊去氧膽酸，測(cè)量給藥前-48、-42、-36、-30、-24、-18、-12、-6、0 h體內(nèi)基線值，若基線穩(wěn)定，可選取給藥前-24 h~0 h的數(shù)據(jù)進(jìn)行基線校正。每個(gè)受試者基線校正時(shí)應(yīng)使用各自對(duì)應(yīng)周期基線水平的平均值。試驗(yàn)不同周期間的基線期和給藥期受試者進(jìn)餐標(biāo)準(zhǔn)和時(shí)間應(yīng)保持一致。對(duì)于餐后組，應(yīng)在測(cè)量給藥-48、-24、0 h基線值前30分鐘內(nèi)進(jìn)食完相同標(biāo)準(zhǔn)餐，采血終點(diǎn)選取72 h。

1、研究類(lèi)型

FDA和CDE個(gè)藥指導(dǎo)原則推薦兩序列、兩周期交叉試驗(yàn)的設(shè)計(jì)，開(kāi)展單次給藥的空腹及餐后人體生物等效性研究。

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]研究可知，經(jīng)校準(zhǔn)后熊去氧膽酸膠囊Cmax個(gè)體內(nèi)變異為24.4%~34.8%，AUC的個(gè)體內(nèi)變異約為1.04%~21.7%左右，提示本品個(gè)體內(nèi)變異波動(dòng)大，且原研說(shuō)明書(shū)顯示總熊去氧膽酸半衰期t1/2為3.5~5.8天，考慮清洗期設(shè)計(jì)和受試者依從性，建議采用兩周期的交叉設(shè)計(jì)。

 

2、血樣采集

根據(jù)原研說(shuō)明書(shū)可知，口服給藥后熊去氧膽酸1小時(shí)達(dá)到血漿峰濃度，第二個(gè)峰濃度在3小時(shí)，其半衰期為3.5~5.8天，原研資料以及文獻(xiàn)研究中藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：

注：[3]為原研資料，[8]~[11]為文獻(xiàn)研究。

根據(jù)上述PK參數(shù)，BE研究采血點(diǎn)設(shè)計(jì)時(shí)需關(guān)注達(dá)峰時(shí)間范圍以及半衰期，科學(xué)地設(shè)計(jì)采血點(diǎn)以滿(mǎn)足生物等效性研究的需要。根據(jù)原研相關(guān)資料和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，非結(jié)合熊去氧膽酸和總熊去氧膽酸空腹的Tmax中位值集中在1.0~3.78 h，極值范圍為0.5~6.0 h，因此可在該達(dá)峰范圍內(nèi)科學(xué)的設(shè)計(jì)采血點(diǎn)；總熊去氧膽酸半衰期t1/2為3.5~5.8天，為長(zhǎng)半衰期藥物，根據(jù)《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》與《熊去氧膽酸膠囊生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，本品消除半衰期較長(zhǎng)且存在腸肝循環(huán)，可能導(dǎo)致末端消除相波動(dòng)，從而影響AUC0-∞估算的可靠性，此時(shí)可采用Cmax和AUC0-t為評(píng)價(jià)對(duì)象，采血終點(diǎn)截取到給藥后72 h，因此采血終點(diǎn)可設(shè)定為72 h。

目前無(wú)研究表明血漿中非結(jié)合熊去氧膽酸和總熊去氧膽酸在中國(guó)人群體內(nèi)基線值穩(wěn)定，故參考CDE發(fā)布的《熊去氧膽酸膠囊生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，測(cè)量給藥前-48、-42、-36、-30、-24、-18、-12、-6、0 h體內(nèi)基線值，每個(gè)受試者基線校正時(shí)使用各自對(duì)應(yīng)周期基線水平的平均值。

 

3、檢測(cè)物質(zhì)

根據(jù)《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》，一般推薦僅測(cè)定原形藥物，對(duì)于從原形藥物直接代謝產(chǎn)生的主要代謝產(chǎn)物，當(dāng)代謝產(chǎn)物主要產(chǎn)生于進(jìn)入體循環(huán)以前，并且代謝產(chǎn)物顯著影響藥物的安全性和有效性時(shí)，應(yīng)測(cè)定該代謝產(chǎn)物。

作為一種內(nèi)源性膽汁酸，UDCA具有非常獨(dú)特的ADME特征。如上圖所示，具體表現(xiàn)為往復(fù)的肝-膽-腸循環(huán)處置過(guò)程及其中廣泛的宿主-腸道菌群共代謝，由此導(dǎo)致其主要蓄積在肝-膽-腸構(gòu)成的膽汁酸池中。最終主要由腸道菌群代謝為不溶于水的石膽酸（lithocholic acid，LCA）通過(guò)糞便排泄[12]。

UDCA在體內(nèi)的主要存在的活性形式是熊去氧膽酸甘氨酸結(jié)合物（GUDCA）和?；撬峤Y(jié)合物（TUDCA），同時(shí)FDA與CDE個(gè)藥指導(dǎo)原則推薦對(duì)血漿中的游離UDCA和總UDCA的血藥濃度進(jìn)行測(cè)量以進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)分析，因此本品生物等效性研究中的檢測(cè)物質(zhì)為血漿中的游離UDCA和總UDCA。

 

4、生物等效性評(píng)價(jià)

由于內(nèi)源性UDCA的合成和代謝清除速率受腸道菌群和宿主的代謝水平以及飲食的綜合影響，存在隨飲食節(jié)律波動(dòng)的基線背景，因此應(yīng)使用基線校正后的血漿中的游離UDCA和總UDCA的PK參數(shù)來(lái)評(píng)估生物等效性。

本品消除半衰期較長(zhǎng)且存在腸肝循環(huán)，可能導(dǎo)致末端消除相波動(dòng)，從而影響AUC0-∞估算的可靠性，可采用Cmax和AUC0-t為評(píng)價(jià)對(duì)象，生物等效性接受標(biāo)準(zhǔn)為受試制劑相比參比制劑的Cmax和AUC0-t的幾何均值比90%置信區(qū)間在80.00%~125.00%范圍內(nèi)。

 

5、國(guó)內(nèi)申報(bào)情況分析

原研1994年04月17日于國(guó)內(nèi)首次獲得批準(zhǔn)上市，目前安士制藥（中山）有限公司、上海宣泰醫(yī)藥科技股份有限公司和成都賽璟生物醫(yī)藥科技有限公司先后以化藥4類(lèi)報(bào)產(chǎn)該藥并視同通過(guò)一致性評(píng)價(jià)，另有3家按照化藥4類(lèi)已提交申報(bào)資料，市場(chǎng)可謂競(jìng)爭(zhēng)激烈。

綜合分析目前該品種在CDE登記的臨床試驗(yàn)信息，所有申報(bào)生產(chǎn)的企業(yè)空腹和餐后試驗(yàn)均采用兩周期、兩序列交叉設(shè)計(jì)，樣本量為52~160例不等，提示本品BE試驗(yàn)樣本量與兩制劑間差異、個(gè)體內(nèi)變異及臨床試驗(yàn)過(guò)程中的基線影響因素的管理相關(guān)，開(kāi)展體內(nèi)BE研究前應(yīng)充分評(píng)估制劑差異，臨床試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注重個(gè)體內(nèi)變異控制，提高臨床試驗(yàn)質(zhì)量。

 

五、總結(jié)

UDCA在肝病治療領(lǐng)域具有重要地位，但是作為一種內(nèi)源性藥物，其在人體內(nèi)具有較復(fù)雜的代謝過(guò)程，仿制藥研發(fā)具有較高的技術(shù)挑戰(zhàn)，包括長(zhǎng)半衰期、肝腸循環(huán)、代謝物轉(zhuǎn)化等問(wèn)題，需特別關(guān)注試驗(yàn)設(shè)計(jì)及臨床試驗(yàn)過(guò)程中的臨床管控。

本文總結(jié)了UDCA生物等效性研究的現(xiàn)狀，結(jié)合現(xiàn)有相關(guān)BE技術(shù)指南、研究現(xiàn)狀和關(guān)鍵技術(shù)挑戰(zhàn)，期望為UDCA仿制藥研發(fā)BE試驗(yàn)的技術(shù)攻關(guān)提供有價(jià)值的參考。

我司擁有豐富的內(nèi)源性藥物及存在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化的BE項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，其中內(nèi)源性物質(zhì)包括丁二磺酸腺苷蛋氨酸、黃體酮陰道緩釋凝膠、乙酰半胱氨酸顆粒及泡騰片等，以及依折麥布片等存在復(fù)雜體內(nèi)代謝過(guò)程的藥物。我司致力于幫助眾多申辦者進(jìn)行復(fù)雜項(xiàng)目的臨床評(píng)價(jià)，助力醫(yī)藥研發(fā)。

 

六、參考文獻(xiàn)

[1]尤梅桂.熊去氧膽酸的研究概況[J].藥學(xué)研究,2021,40(03):199-202.DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2021.03.013.

[2]邱科先.自制熊去氧膽酸膠囊與參比制劑體外溶出一致性評(píng)價(jià)研究[J].廣東化工,2021,48(16):72-73+91.

[3]Ursofalk原研說(shuō)明書(shū)（澳大利亞）

[4]丁倩,唐柳.5種粉碎工藝對(duì)熊去氧膽酸膠囊體外溶出的影響[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2016,51(23):2037-2040.

[5]U.S.Food and Drug Administration.Draft Guidance on Ursodiol.2021.

[6]European Medicines Agency.Ursodeoxycholic acid product-specific bioequivalence guidance.2021.

[7]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心.熊去氧膽酸膠囊生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則.2021.

[8]Ursodeoxycholzuur Strides 250 mg,capsules,hard Strides Arcolab International Ltd.,United Kingdom(Public Assessment Report)

[9]Grinterol 250 mg hard capsules(Public Assessment Report)

[10]Ursosan 250 mg hard capsules(Public Assessment Report)

[11]顏耀東,楊忠民,黃曉潔,謝寧,張偉.熊去氧膽酸膠囊人體生物等效性研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2008(03)213-217.

[12]丁勁松,王安娜,黃亮,賈偉,劉昌孝,蘭軻.人體熊去氧膽酸代謝及其生物等效性研究的技術(shù)挑戰(zhàn)[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2020,55(09)2070-2079.DOI10.16438j.0513-4870.2020-0447.

 

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