作者  |  馬科強(qiáng)

校對(duì)  |  王欣桐

 

 

一、背景

高膽固醇血癥發(fā)病率逐年升高，人群分布越來越趨向于中年人。國(guó)內(nèi)外大量的流行病學(xué)、實(shí)驗(yàn)室研究、基因?qū)W和臨床試驗(yàn)等結(jié)果一致表明，膽固醇升高與動(dòng)脈粥樣硬化性疾病密切相關(guān)，尤其是低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平升高是冠心病的致病性危險(xiǎn)因素。原發(fā)性高膽固醇血癥是指非其他疾病引起，可能是因遺傳缺陷或后天飲食習(xí)慣、生活方式，以及其他自然環(huán)境因素所致的高膽固醇血癥。引起原發(fā)性高膽固醇血癥的主要因素有：遺傳因素、膳食因素、體重、飲酒、精神壓力等。家族性高膽固醇血癥（FH）是由低密度脂蛋白受體（LDLR）基因突變導(dǎo)致的遺傳疾病，且為常染色體顯性遺傳疾病。FH患者由于血漿低密度脂蛋白（LDL）過高，能夠引起早發(fā)冠心病，同時(shí)FH患者比沒有遺傳背景的高脂蛋白血癥患者動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展速度快且伴隨著嚴(yán)重的其他器官疾病，因此及時(shí)早期診斷和治療是必要的。

依折麥布（Ezetimibe，EZ）是首個(gè)獲得FDA批準(zhǔn)上市的選擇性腸膽固醇吸收抑制劑，通過阻斷膽固醇外源性吸收途徑來降低血液中的膽固醇。依折麥布不抑制肝臟中膽固醇的合成，也不增加膽汁酸的排泄，相反，依折麥布定位并似乎作用于小腸的刷狀緣并抑制膽固醇的吸收，從而導(dǎo)致腸內(nèi)膽固醇向肝臟的遞送減少。這會(huì)減少肝膽固醇的儲(chǔ)存，并增加血液中膽固醇的清除率，能有效降低低密度脂蛋白膽固醇和總膽固醇水平，適用于治療原發(fā)性高膽固醇血癥、純合子家族性高膽固醇血癥和純合子谷甾醇血癥（或植物甾醇血癥），療效和安全性均較好。

依折麥布由先靈葆雅和默克公司共同研制，于2002年10月25日獲美國(guó)食品藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)，之后于2007年4月18日獲日本醫(yī)藥品醫(yī)療器械綜合機(jī)構(gòu)（PMDA）批準(zhǔn)，由默沙東上市銷售，我國(guó)最早于2006年進(jìn)口先靈葆雅公司的依折麥布片（Ezetrol，規(guī)格10 mg）。目前，國(guó)內(nèi)進(jìn)口產(chǎn)品為MSD Pharma（Singapore）Pte.Ltd.的依折麥布片（商品名：益適純® EZETROL®，規(guī)格10 mg）。目前（截止至2022年08月）國(guó)內(nèi)按照化學(xué)藥品注冊(cè)分類4類申報(bào)已獲批的企業(yè)包括湖南方盛制藥股份有限公司、蘇州華健瑞達(dá)醫(yī)藥技術(shù)有限公司、重慶圣華曦藥業(yè)股份有限公司和北京福元醫(yī)藥股份有限公司，獲批規(guī)格均為10 mg。

本文結(jié)合相關(guān)指導(dǎo)原則和文獻(xiàn)研究，詳細(xì)闡述依折麥布片人體生物等效性試驗(yàn)的一般考慮，對(duì)本品人體生物等效性研究的若干關(guān)鍵設(shè)計(jì)進(jìn)行探討，旨在為此類產(chǎn)品的仿制和注冊(cè)申報(bào)提供參考。

 

二、處方、理化性質(zhì)與溶出

1.處方

根據(jù)Zetia®美國(guó)FDA公布的說明書，依折麥布片原研處方信息如下：

2、理化性質(zhì)

3、溶出

依折麥布為BCS II類藥物，在各溶出介質(zhì)中溶解性均較差，根據(jù)依折麥布日本仿制藥審評(píng)報(bào)告[3]的溶出數(shù)據(jù)，在未添加表面活性劑的情況下，依折麥布在pH1.2、pH4.0、pH6.8和水溶液介質(zhì)中的溶出度較低，各個(gè)介質(zhì)中120 min內(nèi)溶解度均低于20%（見圖1）。

 

圖1 エゼチミブ錠10mg「杏林」溶出曲線

 

相關(guān)文獻(xiàn)研究對(duì)原研制劑溶出的考察[2]，在pH1.2、pH4.5、pH6.8、水溶液四個(gè)條件以及不同濃度的SDS（十二烷基硫酸鈉）條件下的溶出情況如下：

圖2 不同濃度SDS情況下四種溶出介質(zhì)中依折麥布的溶出情況

 

由上述結(jié)果可知，本品溶解度低，在溶劑中加入不同比例的表面活性劑可提高其溶解度，SDS的增溶作用較為顯著，隨著比例增加，溶出量不斷增加。如果表面活性劑的濃度過低，溶出量過低，則隨機(jī)誤差較大，難以準(zhǔn)確評(píng)估制劑差異；但若表面活性劑濃度過高，溶出速度過快則導(dǎo)致區(qū)分力將不夠，同樣難以評(píng)估制劑差異。因此，選擇合適的表面活性劑濃度，能夠在溶出數(shù)據(jù)評(píng)估中呈現(xiàn)良好的區(qū)分力，對(duì)體外評(píng)估自研制劑與參比制劑的溶出差異至關(guān)重要。

 

三、生物等效性評(píng)價(jià)

依折麥布片可吸收進(jìn)入血循環(huán)，療效與血藥濃度可以建立良好的相關(guān)性，根據(jù)《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》，本品應(yīng)以PK-BE的方式評(píng)估受試制劑與參比制劑的生物等效性。FDA、EMA和CDE分別于2008年10月、2018年12月和2021年09月頒布了依折麥布片生物等效性研究技術(shù)個(gè)藥指導(dǎo)原則（含草案），對(duì)本品生物等效性研究的關(guān)鍵設(shè)計(jì)均做出了相關(guān)的推薦。

1、研究類型

FDA和CDE個(gè)藥指導(dǎo)原則均推薦兩序列、兩周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，開展單次給藥的空腹及餐后人體生物等效性研究，CDE指導(dǎo)原則推薦也可采用重復(fù)交叉設(shè)計(jì)。EMA個(gè)藥指導(dǎo)原則僅推薦進(jìn)行空腹研究，考慮到本品用法用量推薦空腹和餐后服用均可，因此研究類型選擇同時(shí)開展單次給藥空腹和餐后生物等效性研究更符合評(píng)價(jià)目的。

本品體內(nèi)過程復(fù)雜，有明顯的肝腸循環(huán)，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在體內(nèi)高變異特征；根據(jù)已上市仿制藥產(chǎn)品審評(píng)資料，Cmax最大變異超過30%（見圖3）[4]。因此，重復(fù)交叉設(shè)計(jì)有利于正確評(píng)估制劑差異，降低制劑差異誤判的風(fēng)險(xiǎn)。

 

圖3 Ezetimebe 10mg Tblets PL 20117/0342公共審評(píng)報(bào)告

 

2、血樣采集

參照《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》，應(yīng)恰當(dāng)?shù)卦O(shè)定樣品采集時(shí)間，使其包含吸收、分布、消除相。一般建議每位受試者每個(gè)試驗(yàn)周期采集12-18個(gè)樣品，其中包括給藥前的樣品。采樣時(shí)間不短于3個(gè)末端消除，末端消除相應(yīng)至少采集3-4個(gè)樣品以確保準(zhǔn)確估算末端消除相斜率。

依折麥布片的主要成份依折麥布在人體內(nèi)廣泛結(jié)合成具藥理活性的酚化葡萄糖苷酸（依折麥布-葡萄糖苷酸結(jié)合物，EZ-Glu），血漿中EZ和EZ-Glu的達(dá)峰時(shí)間不同，原研資料以及文獻(xiàn)研究中藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：

因此，BE研究采血點(diǎn)設(shè)計(jì)時(shí)需同時(shí)兼顧空腹和餐后、依折麥布和總依折麥布的達(dá)峰時(shí)間范圍以及半衰期，以滿足生物等效性研究的需要。

 

3、檢測(cè)物質(zhì)

根據(jù)《以藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)的化學(xué)藥物仿制藥人體生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》，一般推薦僅測(cè)定原形藥物，對(duì)于從原形藥物直接代謝產(chǎn)生的主要代謝產(chǎn)物，當(dāng)代謝產(chǎn)物主要產(chǎn)生于進(jìn)入體循環(huán)以前，并且代謝產(chǎn)物顯著影響藥物的安全性和有效性時(shí)，應(yīng)測(cè)定該代謝產(chǎn)物。建議以原形藥物評(píng)價(jià)生物等效性，代謝產(chǎn)物的相關(guān)數(shù)據(jù)用于進(jìn)一步支持臨床療效的可比性。

若參照本該指導(dǎo)原則，應(yīng)檢測(cè)母藥（依折麥布，EZ）和代謝產(chǎn)物（依折麥布-葡萄糖醛酸結(jié)合物，EZ-Glu），并以EZ評(píng)價(jià)生物等效性，代謝產(chǎn)物用于支持臨床療效的可比性。但依折麥布在體內(nèi)的過程復(fù)雜，采用指導(dǎo)原則中的通用規(guī)定不能科學(xué)合理地評(píng)價(jià)受試制劑和參比制劑的生物等效性。

依折麥布口服吸收入血后，大部分EZ在肝臟與葡萄糖醛酸結(jié)合（Ⅱ相反應(yīng)）而快速代謝為有藥理活性的EZ-Glu，僅有極少量EZ進(jìn)行氧化代謝（Ⅰ相反應(yīng)）。EZ-Glu生成后，從循環(huán)系統(tǒng)中經(jīng)由膽汁大量排出至小腸，并在小腸處發(fā)生脫葡萄糖醛酸反應(yīng)而回轉(zhuǎn)為EZ，繼而又可經(jīng)由小腸上皮細(xì)胞被再次吸收入血。如此反復(fù)，使得腸黏膜絨毛上總是保持有一定濃度水平的EZ-Glu和EZ，持續(xù)發(fā)揮抑制腸道吸收膽固醇的作用。服藥后，血漿中的EZ和EZ-Glu分別占總活性分子（總依折麥布，EZ+EZ-Glu）濃度的10%~20%和80%~90%（見圖4）。

 

圖4 EZ與EZ-Glu在人體內(nèi)的相互轉(zhuǎn)化過程

 

根據(jù)依折麥布體內(nèi)過程可知，EZ是發(fā)揮主要藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，但循環(huán)中EZ的水平受多個(gè)轉(zhuǎn)化過程影響，其水平不能直接反應(yīng)制劑的吸收速度和程度，而循環(huán)中總依折麥布能反應(yīng)制劑吸收進(jìn)入循環(huán)的總量。因此FDA和CDE的指導(dǎo)原則均推薦檢測(cè)血漿中的依折麥布（EZ）和總依折麥布（EZ+EZ-Glu）的血藥濃度，即以發(fā)揮主要療效的物質(zhì)（EZ）和反映吸收程度的物質(zhì)（EZ+EZ-Glu）來評(píng)價(jià)依折麥布片的生物等效性。

針對(duì)總依折麥布濃度的檢測(cè)，有兩種方式：一是分別檢測(cè)EZ和EZ-Glu，再計(jì)算EZ+EZ-Glu，但該方式需注意計(jì)算EZ+EZ-Glu時(shí)應(yīng)采用摩爾濃度進(jìn)行加和計(jì)算，而非質(zhì)量濃度；二是采用葡萄糖酸苷酶水解的方式將血漿中的EZ-Glu完全轉(zhuǎn)化為EZ，然后再對(duì)水解后混合物中的EZ總量進(jìn)行定量，即可獲得較為準(zhǔn)確的血藥濃度，該方式需要進(jìn)行充分的驗(yàn)證，確保水解的完全。

 

4、生物等效性評(píng)價(jià)

等效性分析方法需要根據(jù)設(shè)計(jì)類型和個(gè)體內(nèi)變異的結(jié)果選擇ABE或RSABE的方式進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)。由于EZ-Glu半衰期較長(zhǎng)，若設(shè)計(jì)中采用截取72 h作為采樣終點(diǎn)的方式，則評(píng)價(jià)指標(biāo)應(yīng)以AUC0-72代替AUC0-∞。

 

四、總結(jié)

依折麥布片在體內(nèi)轉(zhuǎn)化過程較為復(fù)雜，進(jìn)行仿制藥開發(fā)時(shí)需要充分理解品種的體內(nèi)過程，正確研判體內(nèi)外相關(guān)條件下制劑的差異，并采用科學(xué)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，關(guān)注影響個(gè)體內(nèi)變異的因素，采用準(zhǔn)確的生物樣本測(cè)定方法，才能更好、更快地推進(jìn)本品一致性評(píng)價(jià)的進(jìn)程。

目前，我司在高變異藥物領(lǐng)域積累了扎實(shí)的理論基礎(chǔ)和豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，其中，依折麥布片已完成一項(xiàng)人體生物等效性研究。都正團(tuán)隊(duì)提供了集方案設(shè)計(jì)、受試者招募、臨床監(jiān)查&稽查、生物樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)管理與統(tǒng)計(jì)分析于一體的全流程服務(wù)。

 

五、參考文獻(xiàn)

[1]中國(guó)成人血脂異常防治指南制訂聯(lián)合委員會(huì). 中國(guó)成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）[J]. 中華健康管理學(xué)雜志, 2017, 11(1): 7-28.

[2]起燕江.依折麥布片的處方工藝研究及質(zhì)量評(píng)價(jià)[D].昆明醫(yī)科大學(xué),2021.DOI:10.27202/d.cnki.gkmyc.2021.000534.

[3]エゼチミブ錠10mg「杏林」IF文件,PMDA.

[4]Ezetimebe 10mg Tablets PL 20117/0342.PAR.

[5]依折麥布片（益適純®）說明書.

[6]Zetia FDA lable.

[7]ゼチーア錠10mg IF文件

[8]胡展晴,黃潔,陽(yáng)國(guó)平,崔暢,張行飛,葉玲,陽(yáng)曉燕,楊雙.依折麥布片在中國(guó)健康受試者中的藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2022,38(03):243-248.DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2022.03.012.

[9]Feifei Sun,Yanping Liu,Ting Li et al.Pharacokinetics and Bioequivalence of Ezetimibe Tablet versus Ezetrol®:An Open-Label,Randomized,Two-Sequence Crossover Study in Healthy Chinese Subjects,03 August 2022,PREPRINT(Version 1)available at Research Square[https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-1797801/v1]

[10]Ezetimebe 10mg Tablets PL 35646/0065.PAR.

[11]《依折麥布片生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》.CDE

 

預(yù)知更多品種分析，請(qǐng)咨詢↓↓↓